SEP SNEST DGEST
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE CIUDAD ALTAMIRANO.
PRÁCTICA No.1.
QUE PRESENTAN:
Fanny Imelda Pastenes Felizola
Deyanira Vergara Pérez
Zulai Espinoza AVianeda
Flor del Carmen Dorantes Nava
Luis Antonio Flores Hernández
LICENCIATURA EN BIOLOGÍA
Ciudad Altamirano, Gro. México. 20 Febrero
del 2012
Ciudad Altamirano, Gro. México. 20 Febrero
del 2012
“RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO DE CULTIVO
DE TEJIDOS”
1Dorantes N.F.C., 1Espinoza A.Z., 1Flores
H.L.A., 1Pastenes F. F. I. 1
Vergara P.D.
1Instituto Tecnológico de Cd. Altamirano
RESUMEN
El
presente trabajo tuvo como objetivo conocer las diferentes áreas y equipos del
laboratorio de cultivo de tejidos vegetales, así mismo conocer las normas de comportamiento y
seguridad dentro del mismo. Posteriormente
se realizo la visita a las
instalaciones del laboratorio del
Instituto Tecnológico de ciudad Altamirano, de esta Ciudad, consecutivamente se
dio a conocer las normas y la seguridad del laboratorio, respectivamente se anoto en una libreta de
apunte las áreas las cuales se encontró
dentro del laboratorio, entre ellas se encontró el área de preparación de medios,
área de lavado y esterilización, área de transferencia y siembra, etc., así mismo
se anoto las soluciones dentro del área de preparación., por el cual el
resultado esperado fue de gran importancia para nosotros como alumnos
investigadores ya que sí se logró reconocer las áreas dentro del mismo, así como
también la seguridad y el comportamiento que se debe tener dentro del
laboratorio de cultivo de tejidos, con ello se demostró que un laboratorio de
cultivo de tejido es de gran importancia para realizar propagaciones in vitro, tomando un explante de la
planta, utilizando hormonas de crecimiento vegetal, de acuerdo con lo planteado
se alcanzo el objetivo presente en esta
práctica.
Palabras claves: áreas del
laboratorio, cultivo de tejidos, propagación in vitro, explante, Hormonas de crecimiento vegetal.
ABSTRACT
This
work aimed to identify the different areas and laboratory equipment plant
tissue culture, likewise know the rules of behavior and safety within it. Subsequently conducted a visit to the
laboratory facilities of the Technological Institute of Ciudad Altamirano, of
this City, was released consecutively standards and laboratory safety,
respectively, were scored in a Record Book which areas are found within the laboratory, including the area found
media preparation, washing and sterilization area, and seeding transfer area,
etc.., likewise be scored the solution within the staging area., whereby the
expected result was veryimportance to us as
researchers and students were also recognized that other areas within it, as
well as safety and behavior that should be within the tissue culture
laboratory, it was demonstrated with a laboratory tissue culture is of
great importance for propagation in vitro, using a plant explant, using plant
growth hormones, raised according to the present purpose is reached in
practice.
Keywords: areas
of the laboratory, tissue culture, propagation in vitro, explant, plant growth
hormones.
ÍNDICE
PÁGINA
Antecedentes……………………………………………………………………………………………………………5
Definición del
problema………………………………………………………………………………..........6
Objetivos..………………………………………………………………………………………………………………7
Justificación…………………………………………………………………………………………………………8
Fundamento teórico…………………………………………………………………………………………….9
Materiales y Métodos……………………………………………………………………………………........13
Resultados……………………………………………………………………………………………………………16
Conclusiones y
Recomendaciones…………………………………………………………..............22
Fuentes
consultadas………………………………………………………………………………………......23
Anexos……………………………………………………………………………………………………………………25
I.
ANTECEDENTES
Jaime Izasa Cadavid
del instituto politécnico de Colombia mencionó que el laboratorio sirve de
apoyo para el área de la Biotecnología Vegetal, específicamente para la
asignatura Cultivo de Tejidos Vegetales in vitro y otras relacionadas
con el sector agrícola (Sanidad vegetal, Control Biológico). Debe ser un lugar
seguro para trabajar donde no se deben permitir descuidos o bromas. Para ello
se tendrán siempre presente los posibles peligros asociados al trabajo con
materiales peligrosos. Nunca hay excusa para los accidentes en un laboratorio
bien equipado en el cual trabaja personal bien informado.
W. M. Roca y L.A.
Mroginski, establecieron que el laboratorio de cultivo de tejidos debe disponer
de un área destinada al establecimiento, crecimiento y multiplicación de las
plantas producidas; esta área es especialmente necesaria en los laboratorios de
investigación y desarrollo y en los de producción comercial. La decisión de
establecer un laboratorio de cultivo de tejidos requiere de un estudio y
análisis crítico acerca de la necesidad de hacerlo, el establecimiento y
funcionamiento de un laboratorio debe ser, idealmente, el producto de esfuerzos
multidisciplinarios.
II.
DEFINICIÓN DEL PROBLEMA
Los laboratorios están estructurados en
áreas donde se realizan procesos específicos; cada una de ésta cuenta con el
material y equipo adecuado, por ello es importante que cada uno de los alumnos
y docentes conozcan la ubicación y el uso de cada área, así como el material
que éstas poseen, sin dejar atrás las normas establecidas en el mismo, con la
finalidad de realizar las prácticas con éxito.
III.
OBJETIVOS
·
Conocer las diferentes áreas y equipos básicos de un
laboratorio de cultivo de tejidos vegetales.
·
Conocer las principales normas de comportamiento y
seguridad dentro del laboratorio.
IV.
JUSTIFICACIÓN
El presente trabajo se realizo con el fin
de tener conocimiento sobre las áreas que existen dentro del laboratorio de
tejidos de cultivos vegetales, así como también los alumnos investigadores
reconozcan como llevar a cabo un cultivo de tejido vegetal, que material
utilizar y en qué área llevar a cabo cada uno de estos pasos, sobre todo que soluciones realizar para
llevar a cabo la preparación.
V.
FUNDAMENTO TEORICO
El cultivo de tejidos ha sido considerado durante
mucho tiempo como una mezcla de ciencia y arte. Fue considerada inicialmente
como una técnica particularmente difícil de aprender. Sin embargo, estas
dificultades de los comienzos están hoy en día prácticamente superadas gracias
a factores como la disponibilidad de antibióticos, los medios de composición
definida, las instalaciones asépticas (salas de cultivo limpias, cabinas de
flujo laminar, incubadoras estériles), dispositivos de cultivo (botellas con
tapones filtrantes, placas de Petri ventiladas; avances técnicos y la aparición
de un buen número de compañías comerciales de suministro de medios, sueros,
equipo han hecho del cultivo celular una tecnología con buena reproducibilidad
(Reina, T Merlín 2003).
Estos principios son básicamente invariables
en todos los laboratorios de cultivo de tejido vegetal, su aplicación puede
presentar variaciones en magnitud y complejidad, dependiendo de los objetivos
del laboratorio; así, mientras que un laboratorio de investigación puede ser
pequeño en tamaño pero muy especializado en equipos e instalaciones, uno de
producción comercial tiende a ser más grande y simple. Un laboratorio de
investigación puede también tener un rol de enseñanza y, en este caso, es
frecuente que se asignen en él áreas especiales para la enseñanza y la
demostración (Roca & Mroginski 1982).
Es muy importante contar con todas
las áreas indispensables para los laboratorios de
biotecnología vegetal, ya que cada una de ellas cumple
funciones importantes dentro de las prácticas, y observando
las diferenciaciones de estas, dentro del laboratorio. También
debe contar con una buena climatización, del área de trabajo, que es primordial
para el buen desempeño de las prácticas. (Flaschka, h. a 1980)
El fundamento teórico del cultivo in vitro
es el concepto de la totipotencialidad celular. La totipotencia es la capacidad
que tiene una célula somática de regenerar un planta completa e igual a la
planta madre. (Radice, T. et al 1983)
El laboratorio de tejidos debe disponer de
un área destina al establecimiento, crecimiento y multiplicación de las plantas
producidas; esta área es especialmente necesaria especialmente en los
laboratorios de investigación y desarrollo y en los de producción comercial.
Aquellos laboratorios que se dedican a la producción y distribución de
materiales de sanidad certificada, por ejemplo, deben incluir además
facilidades para la cuarentena y para la evaluación fitosanitaria.
Finalmente, la decisión de establecer un
laboratorio de cultivo de tejidos requiere de un estudio y análisis crítico
acerca de la necesidad de hacerlo, dentro de un contexto integral del
desarrollo de la investigación y la producción agrícola
o forestal de una región o país. Por lo
tanto, el establecimiento y funcionamiento del laboratorio debe ser, idealmente
el producto de esfuerzos multidisciplinarios. Existen recomendaciones para la
planificación de ciertos tipos de laboratorios; como ejemplo se pueden
mencionar las relacionadas con la propagación masiva de fresas (Boxus et al.,
1984).
Un laboratorio de cultivo de tejidos se
puede dividir en áreas separadas para las diferentes funciones que se
desarrollan en la práctica sin embargo, algunas de las funciones pueden
desarrollarse en un mismo ambiente. Las áreas o secciones principales son:
Área de preparación. Se utiliza
principalmente para preparar los medios del cultivo, pero debe proveer también
un espacio para almacenarlos materiales de vidrio y de plásticos, y los
reactivos químicos. Este ambiente debe contar con mesas de trabajo para la preparación
de los medios y para colar las balanzas, el medidor de pH, los platos calientes
con agitación y otros elementos.
Áreas de lavado y de esterilización. Puede
estar constituida por dos áreas conectadas
entre sí, o por un solo ambiente, y puede estar localizada dentro del
área general de preparación. Esta área de lavado debe incluir por lo menos un lavado grande de
pureza, preferiblemente agua doblemente destilada; para el efecto se debe usas
un destilador de vidrio o de material no tóxico y un desionizador de agua
colocado entre el destilador y el lavadero. El área de esterilización debe
tener espacio para el autoclave vertical u horizontal, el cual puede ser
pequeño (olla de presión).
Área de transferencia. En esta área del
laboratorio se realiza el trabajo de escisión inoculación y transferencia de
los explantes a los medios de cultivo.
Dado que este trabajo demanda los más altos niveles de limpieza ambiental, se
recomienda la instalación de gabinetes de flujo horizontal o vertical de aire
filtrado bajo presión o la construcción de cuartos de transferencia. Sin
embargo, ciertas operaciones de inoculación, como la excisión y el cultivo de
ápices y meristemos en tubos de ensayo de boca angosta, se pueden realizar
sobre una mesa limpia, ubicada en un lugar del laboratorio libre de corrientes
de aire y polvo.
Área de incubación. Los cultivos se incuban
en un cuarto apropiado o gabinetes o cámaras de crecimiento; éstas pueden ser
más eficientes en cuanto al control ambiental, pero son más costosas. En el cuarto
de incubación se instalan estanterías metálicas o de madera para colocar los
cultivos. Estas estanterías pueden tener dimensiones variables.
Área de observación y examen. Generalmente
los microscopios (estéreo, compuesto, invertido y otros) se localiza tanto en
el área de incubación como en la de transferencia, pero opcionalmente pueden
estar en un área separada. El objetivo de
esta área es realizar observaciones periódicas de los cultivos, tanto en medios
semisólidos como en líquidos.
Área de crecimiento. Las plantas que se
regeneran en el área de incubación se pueden acondicionar o aclimatar y luego
trasplantar en macetas, bandejas o camas apropiadas. Estas operaciones se
pueden llevar a cabo en tinglados, cas de malla o invernadero, dependiendo delas
condiciones climáticas del lugar donde ésta ubicado el laboratorio y de los
requerimientos de aislamiento de los materiales por razones fitosanitarias.
Después del trasplante, las plantas generalmente necesitan un acondicionamiento
gradual a las condiciones de campo, lo cual se puede lograr usando nebulización
húmedas de plásticos, etc.
Material de laboratorio. Suponiendo que se
establecerá un laboratorio de cultivo de tejidos de tamaño, medio, se
requieren, para ponerlo en
funcionamiento, las siguientes piezas del equipo estándar:
En el área de preparación: refrigerador,
balanza (una macrobalanza y una de precisión). Potenciómetro, plancha eléctrica
con agitador magnético, frascos Erlenmeyer, botellas y material de vidrio o
plástico
En el área de lavado y esterilización:
autoclave manual o automática, destiladora de vidrio, gradillas para secado,
bandejas de aluminio y de plástico de varios tamaños, recipientes de plástico
grandes, estufas para esterilización y secado.
En el área de trasferencia: gabinetes de
flujo laminar, microscopio de disección con luz incidente, e instrumentos de
disección: cuchillas, mangos para las cuchillas, pinzas, tijeras, navaja de
afeitar, bandejas, y tacho para basuras.
En el área de incubación: un cuarto con
temperatura, iluminación y humedad relativa controladas; estanterías con
iluminación. (Roca, W. M, Mroginski 1982)
VI. MATERIALES Y MÉTODOS.
6.1 Organización de los estudiantes en grupo
Para entrar al laboratorio fue necesario hacer equipos organizados
de alumnos, con la finalidad de realizar una práctica al 100% satisfactoria, ya
que al trabajar en colectivo, los conocimientos son enriquecidos por cada uno
de los integrantes.
6.2 Recorrido y descripción de las áreas del laboratorio y sus
equipos respectivos
Mediante la observación visual se reconocieron las áreas que
comprende el laboratorio de tejidos de cultivo, así como el equipo y material
con el que cuenta cada una de ellas, para ello fue necesario hacer uso de un
bolígrafo, una libreta de apuntes, contemplando en ésta cada una de las áreas
apreciadas, con la finalidad de obtener información más detallada se hizo uso
de una cámara fotográfica con la cual se obtuvieron imágenes representativas de
cada uno de los sitios visitados.
Además del reconocimiento y material de cada área, se discutió
sobre la función de cada una de ellas, así como la manera de darle un buen uso
a éstas.
6.2.1 Áreas de preparación de medios de cultivos
Para la preparación de los medios de cultivo se lleva a cabo en
una mesa, la cual se esteriliza utilizando agua y jabón para lavarla,
posteriormente se desinfecta con alcohol. Se cuenta con anaqueles para colocar
los materiales de vidrio y de plástico, en los cuales se encontraran probetas
graduadas, pipetas, vasos de precipitado, agitadores, termómetros, pinzas,
matraz erlenmeyer, embudo de separación, cajas de petri, vidrio de reloj, etc.
Así mismo existe un área donde se puede encontrar los reactivos y
sustancias químicas, dicha área se encuentra protegida y en condiciones optimas
para su conservación. Como todo laboratorio se cuenta con refrigeradores donde
se guardan sustancias y muestras que requieren de refrigeración.
El laboratorio cuenta con lavaderos con agua a temperatura
ambiente, éstos tienen tubería y drenaje, son de metal y se encuentran en
condiciones favorables. Al no contar con una instalación con agua esterilizada,
en el laboratorio se hace el agua esterilizada o por su defecto se compra. Se
cuenta con una estufa pequeña para esterilizar algunos materiales, los
depósitos de la basura no son del todo adecuados para el laboratorio.
Actualmente presenta dos cámaras de flujo laminar para llevarse a
cabo la siembra, pero solo una de ellas es la que se encuentra en mejores
condiciones, por tal motivo se requiere de un buen cuidado y manejo.
6.2.4 Área de incubación
Esta es una de las áreas primordiales en el laboratorio de cultivo
de tejidos, sin embargo no existe como tal, por esta razón ésta se adecuará
para tal función.
VII.
RESULTADOS Y DISCUSION
7.1
Áreas del laboratorio
Todo laboratorio sea cual sea su
especialización (de microbiología, de análisis, químico, etc.), se encuentra
estructurado en áreas, las cuales tienen funciones específicas; el laboratorio
de cultivo de tejidos del tecnológico de Cd. Altamirano no es la excepción
aunque este no presenta las áreas marcadas, se pueden adecuar, tal es el caso
del área de incubación.
El laboratorio de cultivo de tejidos del
tecnológico presenta las siguientes áreas:
AREA
DE PREPARACIÓN
FUNCIÓN:
aquí se realiza la preparación de los
medios de cultivo.
MATERIAL:
o
Materiales
de vidrio: vasos de precipitado, frascos, matraz elermeyer (125, 250 y 500 ml)
o
Material
de plástico: probeta graduada
o
Reactivos
EQUIPO:
balanza analítica, medidor de pH, platos
calientes con agitación, refrigerador, incubadora, cámara de crecimiento,
potenciómetro, plancha eléctrica con agitador magnético.
FUNCIÓN:
en este espacio se realiza el lavado y la
esterilización del material a utilizar para la preparación de los medios de
cultivo.
MATERIAL
PARA EL AREA DE LAVADO: Lavadero,
agua caliente, agua fría y agua destilada, basurero para el material vegetal,
inorgánico y de vidrio que se desechen, gradillas para el secado.
En esta misma área se encuentra el
refrigerador, ya que esta alberga material de microbiología, biología
MATERIAL
PARA EL AREA DE ESTERILIZACION: Autoclave (olla de presión), estufa, lavadero, destilador de
vidrio.
AREA
DE TRANSFERENCIA
FUNCIÓN:
en esta área se realiza el trabajo de
excisión, inoculación y transferencia del material vegetal (explantes) a los
medios de cultivo.
MATERIAL:
tubos de ensayo de boca angosta, navaja o
bisturí, mesas, instrumentos de disección, frascos con alcohol, máscaras,
mechero de alcohol, bandejas, guantes, marcadores de aceite, bote de basura.
EQUIPO:
gabinetes de flujo laminar, microscopio.
AREA
DE INCUBACION
FUNCIÓN: en esta parte del laboratorio se realiza
la incubación, es importante que se encuentre a temperatura constante
MATERIAL:
gradillas para tubos
EQUIPO:
cámara de crecimiento, estanterías
metálicas o de madera para colocar los cultivos, aire acondicionado
Es importante recalcar que el laboratorio
no cuenta con esta área como tal, pero ésta se adecuará para tal función.
AREA
DE OBSERVACIÓN Y EXAMEN
FUNCIÓN:
en esta área se lleva a cabo el análisis
periódico de los cultivos realizados
EQUIPO:
microscopio, estereoscopio.
Las áreas que se muestran a continuación no
las presenta el laboratorio, pero son vitales en un laboratorio de cultivo de
tejidos.
AREA
DE CRECIMIENTO
FUNCIÓN:
una vez que los cultivos pasaron al área de
incubación, las plantas son trasplantadas en un recipiente; posteriormente son
llevadas a un sitio propiamente acondicionado y cubierto en el techo con una
maya.
MATERIAL:
macetas, suelo, bandejas.
EQUIPO:
aire acondicionado, cámaras húmedas de
plástico
FUNCIÓN:
esta es el área de recepción de las
muestras o plantas contaminadas (virus, bacterias, hongos) destinadas a la
limpieza clonal; para ello se encuentra protegida de insectos; cabe mencionar
que es un espacio separado del laboratorio para evitar la infestación de otras
muestras.
7.2
Organización de los reactivos
El laboratorio además presenta un área
donde se almacenan los reactivos y sustancias como las sales para la
preparación de los medio de cultivo, los cuales se concentran en un estante;
las sales se pueden identificar por su tapadera azul y el nombre de J. T.
Baker.
7.3
Normas de comportamiento
Las normas de seguridad de los laboratorios son un conjunto de
medidas preventivas destinadas a proteger la salud de los que allí se
desempeñan frente a los riesgos propios derivados de la actividad, con el fin
de evitar accidentes y contaminaciones tanto dentro de su ámbito de trabajo
como hacia el exterior.
as reglas básicas que se establecen en un laboratorio son un conjunto
de prácticas de sentido común que se deben realizar en forma rutinaria al
ingresar a este.
El elemento clave es la actitud proactiva hacia la seguridad y la
información que permita reconocer y combatir los riesgos presentes en el
laboratorio.
Es importante reconocer los elementos de seguridad en el lugar de
trabajo, tales como: extintores, salidas de emergencia, lavaojos.
El laboratorio cuenta con un botiquín de
primeros auxilios en caso de ser necesario.
No se permite ingresar alimentos ni
bebidas.
Se bebe introducir al laboratorio con la
vestimenta apropiada: bata, zapatos cerrados, cabello recogido, guantes, cubre
boca
Es imprescindible mantener el orden y la
limpieza. Cada equipo es responsable directa de la zona que le ha sido
asignada.
Las manos deben lavarse después de cualquier
manipulación de laboratorio y antes de retirarse del mismo.
No se permite correr dentro del laboratorio
Es importante cubrirse la cara de
salpicaduras; para ello se debe utilizar anteojos de seguridad y cubre bocas.
Se debe hacer uso adecuado del material
toxico y flameable
Así que es importante que como alumnos
tomemos las medidas de seguridad correspondientes para evitar algún percance,
siempre atendiendo a las reglas establecidas en el laboratorio
Es
importante que cada laboratorio cuente con las áreas y el material adecuado
para realizar los procesos, técnicas y procedimientos de una manera veraz y
precisa, con la finalidad de obtener en cada una de las prácticas resultados
satisfactorios.
Por
otro lado es necesario conocer y poner en práctica cada una de las reglas o
normas creadas en el laboratorio, puesto que estas se establecieron con la
finalidad de prevenir accidentes en caso de hacer mal uso de las instalaciones,
equipos y sustancias que existen en él, así mismo poner en práctica los valores
entre los alumnos que hacen uso de esta estancia.
Aunque el laboratorio del
tecnológico no cuenta al 100% con las instalaciones o áreas requeridas para el
cultivo de tejidos, se aprovecha al máximo las aéreas y el equipo con el que se
cuenta.
IX. FUENTES
CONSULTADAS
Ø Davies R.D. et al, (1980). Proceeding of the Fourth John Innes Symposium
the Plant Genoma and Second.
Ø Roca &
Mroginski. (1982). Experimentes
in Plant Tissue Culture. Cambridge University Press.
Ø Dixon, R.A.
(1986). Plant Cell Culture A Practical Aproch, I. R. L., Press
Washington D.C.
Ø Evans, D.A. ET,
al. (1983). Handbbook of Plant Cell Culture Vol.I, II, III y IV.
McMillan Publishing Co. New York.
Ø Helgeson, J.P. and
B.J. Deveral (1983). Use of Tissue Culture and Protoplast in Plant
Pathology. Academic Press. New York.
Ø Clifton, E Meloan (1973). Problemas y
Experimentos en Análisis Instrumental. Editorial Reverte Mexicana, S. A. 1973.
México
Ø Flaschka, h. a (1980). Química Analítica
Cuantitativa Vol. II. Compañía Editorial Continental S.A. México.
Ø Garzón g. Guillermo (1989). “Fundamentos
de Química General” serie Skgaum segunda edición.
Ø Homer, D. Chapman (1979). Métodos de
Análisis para suelos, plantas y aguas. Editorial Trillas. México.
Ø Reina T. Merlín (2003).
Análisis Químico Cuantitativo. Editorial Porrua. Saunders, L. Fisicoquímica
para estudiantes de biología, farmacia y medicina
Ø
Dodds J.H., Roberts L.W., 1985, Somatic
embryogenesis, En: Experiments in Plant Tissue Cultura, Cambridge University
Press, 122-132.
Ø Montoya H. L. M., 1991, Cultivo de tejidos
vegetales. Universidad Nacional de Colombia, Seccional Medellín. Facultad de
Ciencias Agropecuarias. Departamento de Agronomía.
Ø Murashige T., Skoog
F., 1962, A revised médium for rapid growth and bioassays with tobacco tisuee
cultures, Physiol. Plant., 15:473-97
Ø Pierik R.L.M., 1990, Cultivo in vitro de las plantas superiores. Ediciones
MundiPrensa, Madrid. www.scribd.com/.../hvRLSAS-RAI-LABORATORIO-DE-CULTIVO-.. 02:30
18/02/12
